凍干機在人工皮膚領(lǐng)域的應(yīng)用

 皮膚是人體zui大的器官，是外源化學(xué)因素(化學(xué)品、藥品等)或物理機械因素(紫外線)毒性作用的器官。傳統(tǒng)的皮膚安全性評價實驗不僅要求一定數(shù)量的動物，而且試驗周期長，成本高。隨著凍干技術(shù)的出現(xiàn)，利用凍干機制備人工皮膚的方法，該方法培養(yǎng)周期短，皮膚功能和活性在體外維持時間長。能滿足毒性檢驗領(lǐng)域的需要。

  利用凍干機制備的人工皮膚可用于進行皮膚毒性測試是藥品、食品添加劑 及原料、農(nóng)藥、生物制品、化學(xué)品健康安全評價的常用檢測項目。

  制作由膠原與細胞外基質(zhì)混合物組成的復(fù)合膠原支架：

1、在無菌條件下將膠原浸泡于冰冷-4'C、 0. 1%的醋酸溶液中，膠原濃度 為8-10mg/Ml范圍，調(diào)節(jié)PH值到7. 2 — 7.3制備膠原溶液，操作應(yīng)在4"進行；

2、在膠原溶液中加入L)步驟所得的細胞外基質(zhì)混合物，得到復(fù)合膠原溶液，復(fù)合膠原溶液中細胞外基質(zhì)混合物與膠原的質(zhì)量比例為2-2. 5: 7. 5-8;

3、取Lml制備好的復(fù)合膠原溶液置于孔徑為3.5 Cm的圓形模具中或6 孔細胞培養(yǎng)板中，用0. Lml的1%—1.5%的戊二醛溶液4'C共價交聯(lián)24士0. 5 小時，用0. 1mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗2-3次，制成海綿狀復(fù)合膠原 基質(zhì)；

將復(fù)合膠原基質(zhì)用波長254nm、36W的紫外線照射除菌后放置在低溫冰箱冷凍過12-18小時，然后再在真空低溫條件下，凍干機?真空冷凍干燥24土1小時，即可得到制備復(fù)合膠原支架。

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